Enzymové stanovení nikotinamidových koenzymů často využívá jejich redukce alkoholdehydrogenasou (NAD+) nebo glukosa-6-fosfátdehydrogenasou (NADP+) v kombinaci se zpětnou neenzymovou oxidací redukovaných forem tetrazoliovou solí za vzniku barevného formazanu [1]. V pozdější modifikaci této metody bylo zavedeno srážení formazanu NaCl, centrifugace sraženiny a její rozpuštění v ethanolu před fotometrickým měřením [2]. Tímto způsobem se zjistí souhrnné množství koenzymu. K obsahu oxidované a redukované formy lze dospět předchozím odstraněním jedné z nich působením vhodného pH a teploty při přípravě buněčného extraktu [3-6]. Teoretická část diplomové práce by měla pojednat o teorii recyklačních metod a přehledně shrnout literární údaje o jejich použití pro stanovení metabolitů. V praktické části bude testována možnost spojit reoxidaci koenzymů s konverzí resazurinu na fluoreskující resorufin, katalyzovanou enzymem FerB [7]. Zavedená metoda bude použita pro sledování redoxního stavu buněk Paracoccus denitrificans během oxidačního stresu. [1] Bernofsky, C., Swan, M., Anal. Biochem. 53, 452-458 (1973) [2] Gibon, Y., Larher, F., Anal. Biochem. 251, 153-157 (1997) [3] Leonardo, M.R. et al., J.. Bacteriol. 178, 6013-6018 (1996) [4] Nikel, P.I. et al., Mol. Microbiol. Biotechnol. 15, 48–54 (2008) [5] Tribelli, P.M. et al. Microbiology 159, 259-268 (2013) [6] Baker, J. L. et al., Bio-protocol 6(16): e1902 (2016) [7] Kučera, I., Sedláček, V., Food Anal. Methods 10, 1301-1307 (2017)