Disertační práce

Značení DNA elektrochemicky aktivními skupinami a luminofory pro analýzu nukleotidových sekvencí

DNA labelling with electrochemically active groups and luminophores for the analysis of nucleotide sequences

Mgr. Zdenka Dudová, učo 211728
Anotace

Tato práce je zaměřena na elektrochemické značení NK, studium interakcí DNA s jinými molekulami, a na využití elektrochemických metod k detekci jednonukleotidových polymorfismů (SNP). Dále jsme sledovali enzymatickou inkorporaci syntetických (modifikovaných) nukleosid trifosfátů do dlouhých řetězců DNA pomocí polymerázové řetězové reakce (PCR), jejich vliv na stabilitu duplexu a obecné elektrochemické …více

Abstract

This work is focused on electrochemical labeling of NA, studying of interactions between DNA and other molecules and utilization of electrochemical methods for single nucleotide polymorphisms (SNPs) detection. There was studied enzymatic incorporation of synthetic (modified) nucleoside triphosphates into long strands of DNA by polymerase chain reaction (PCR) and the influence of such modifications …více

Zadání práce
Moderní metody analýzy nukleových kyselin a jejich interakcí s proteiny často využívají DNA substráty modifikované luminiscenčními značkami. Kromě optických metod se v této oblasti stále více uplatňují také metody elektrochemické, které mohou mít za určitých okolností vyšší citlivost, menší spotřebu analyzovaného materiálu a obvykle jsou spojeny s nižšími náklady. Výzkum a vývoj nových technik analýzy nukleových kyselin, jejich struktury a interakcí tak přirozeně zahrnuje hledání nových způsobů značení DNA elektrochemicky nebo opticky detekovatelnými skupinami. V nedávné době bylo zavedeno několik nových přístupů, založených buď na chemické modifikaci „přirozených“ nukleových kyselin (tj. sestávajících z obvyklých nukleotidů), nebo na inkorporaci značených nukleotidů do DNA pomocí DNA polymeráz. Některé z těchto technik se ukázaly jako velmi vhodné pro praktické aplikace v oblasti analýzy nukleotidových sekvencí. V rámci této práce budou testovány nové typy konjugátů nukleobází (resp. nukleosid trifosfátů) z hlediska jejich vhodnosti pro inkorporaci do DNA pomocí enzymů (DNA polymeráz, terminálních transferáz, případně konstrukce specificky modifikovaných DNA sond pomocí DNA polymeráz a ligáz). Budou zkoumány elektrochemické, případně luminiscenční vlastnosti DNA a syntetických oligonukleotidů modifikovaných těmito značkami a bude optimalizováno jejich voltametrické/optické stanovení. Bude studován vliv modifikace DNA na schopnost vytvářet dvoušroubovici s komplementárním vláknem a na rozpoznání cílových sekvencí vybranými proteiny (jako modelové proteiny schopné rozpoznat různé vlastnosti DNA, včetně nukleotidové sekvence, konformace a chemické modifikace budou využity např. transkripční faktory rodiny p53). Vybrané značky poskytující optimální citlivost a selektivitu detekce budou využity pro bioanalytické účely (např. analýza jednonukleotidových polymorfismů, charakterizace repetitivních sekvencí, monitorování amplifikace specifických fragmentů DNA pomocí PCR nebo detekce DNA-protein interakcí). Literatura k prostudování bude doporučena školitelkou při osobní konzultaci.
Práce zkontrolována:
20. 5. 2016 21:30, Mgr. Hana Pivoňková, Ph.D., učo 13745
Plný text práce
2,3 MB / soubor PDF
Jazyk práce
čeština čeština
Termín obhajoby
9. 9. 2016
Práce byla úspěšně obhájena

Vedoucí

Mgr. Hana Pivoňková, Ph.D., učo 13745
ext NCBR PřF MU

Oponenti

doc. Ing. Renáta Selešovská, Ph.D.
Univerzita Pardubice
doc. RNDr. Petr Pečinka, CSc.
Ostravská univerzita v Ostravě

Konzultanti

doc. RNDr. Miroslav Fojta, CSc., učo 31900
SIBP CSB CEITEC MU
Mgr. Luděk Havran, Dr., učo 30208
ext ÚBioch Chem PřF MU

  • Přidání souboru

    Soubor nebo složku lze nahrát pomocí tlačítka Přidat.
  • Další operace se soubory

    Podrobnosti lze zjistit označením příslušného řádku.
  • Pohled pro experty

    Pro častou práci je možné zvolit režim Více možností.
  • Vyhledávání souborů

    Vyhledávaný výraz můžete zadat přímo do adresního řádku.
  • Rychlý přístup k souborům

    Pomocí funkce Nedávné je možné se rychle vrátit k právě prohlíženým souborům. Oblíbené soubory je také možné označit Hvězdičkou.